平板菌落計數法是如何使用公式計算的？

　　平板菌落計數法，是種統計物品含菌數的有效方法。方法如下:將待測樣品經適當稀釋之后,其中的微生物充分分散成單個細胞，取-定量的稀釋樣液涂布到平板上,經過培養,每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落,即一個單菌落應代表原樣品中的一一個單細胞;統計菌落數，根據其稀釋倍數和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數。
 

　　平板菌落計數法公式為每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復的平均菌落數×稀釋倍數×5。
 

　　一般選擇每個平板上長有30~300個菌落的稀釋度計算每毫升的含菌量較為合適。同一稀釋度的三個重復對照的菌落數不應相差很大，否則表示試驗不精確。實際工作中同一稀釋度重復對照平板不能少于三個，這樣便于數據統計，減少誤差。由10-4、10-5、10-6三個稀釋度計算出的每毫升菌液中菌落形成單位數也不應相差太大。平板菌落計數法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。一般以三個連續稀釋度中的二個稀釋度倒平板培養后所出現的平均菌落數在50個左右為好，否則要適當增加或減少稀釋度加以調整。
 

　　平板菌落計數法使用的培養基為結晶紫中性膽鹽瓊脂培養基，簡稱VRBA。無論是國標，還是培養基的使用說明中都明確表示，VRBA是不需要進行滅菌的，煮沸2min即可使用。特別指出這一點是因為很多朋友都在問VRBA的滅菌條件，對不滅菌的培養基不信任，害怕出現檢測異常，那是因為這些小伙伴們對其中的原理不清楚。
 

　　大腸菌群的定義是在一定培養條件下能夠在發酵乳糖、產酸產氣的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，因此大腸菌群是不能形成芽孢的，在VRBA培養基煮沸的過程中，即使有大腸菌群存在也會被殺滅，所以從培養基帶入污染的可能性是沒有的。當然盛裝培養基的容器是需要進行滅菌的，以免容器引入污染。
 

　　另外，VRBA是一種選擇性的培養基，含有的結晶紫對革蘭氏陽性菌有比較強的抑制作用而對革蘭氏陰性菌幾乎沒有作用，而且平板培養產生的菌落還需要進行復發酵的驗證，因此VRBA培養基就不需要進行滅菌了。但值得注意的是，VRBA需要現配現用，配制出的培養基應當在3h之內使用完畢。